液相色譜柱（LC柱或HPLC柱）長期使用后，常因樣品殘留、雜質污染、緩沖鹽沉淀或有機物吸附等原因導致柱效下降、柱壓升高、色譜峰拖尾等現象，定期清洗柱子可以恢復柱效、延長壽命。下面詳細介紹液相色譜柱的規(guī)范清洗方法。

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一、【常規(guī)反相C18柱（以填料為硅膠基質C18為例）清洗流程】

1. 樣品溶劑轉移

- 先用流動相沖洗柱子10-20分鐘（以清除殘留樣品和過渡到適合洗脫的溶劑體系）。

2. 清洗步驟

(1) 純水沖洗  

  - 適用于水溶性污染物（如緩沖鹽、蛋白多肽等）  

  - 流速：約柱最大允許值的50-70%，方向為正向  

  - 時間：20-30分鐘

(2) 有機溶劑沖洗  

  - 適用于有機類（脂溶性、疏水性）污染  

  - 常用甲醇或乙腈，體積分數逐步遞增（如30%→50%→100%），每步10-20分鐘

  - 最后可用100%甲醇或100%乙腈清洗30分鐘

(3) 強洗脫劑清洗（頑固污染）  

  - 可以用異丙醇、異丙醇/水、氯仿/異丙醇/乙腈（切勿用氯仿于常規(guī)硅膠柱）。

  - 若懷疑有離子、蛋白、脂類污染，可用如下順序：

    - 純水→甲醇（或乙腈）→異丙醇→（必要時）0.1mol/L NaOH（適用碳18耐堿型柱）或0.1mol/L H3PO4（若允許）→純水→甲醇

  - 特別注意：大多數普通C18柱不能用強堿/強酸清洗！

3. 正反沖洗

- 如懷疑柱頭污染（進樣端），可先正向清洗20分鐘，然后反向清洗10-20分鐘再恢復正向。

- 廠家通常推薦僅在不得已時反沖，避免反向沖洗損壞柱頭篩板、填料。

4. 緩沖鹽沉淀處理

- 先用純水沖洗（10-30分鐘），確保鹽分去除后再上有機溶劑，防止有機溶劑使鹽析出堵塞柱子。

5. 恢復平衡

- 清洗后，用流動相平衡柱子至少30分鐘。

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二、【常用清洗溶劑推薦順序】

反相C18柱：  

1. 水（去離子）  

2. 甲醇/水（10%、30%、50%、70%、100%）  

3. 乙腈（10%、30%、50%、70%、100%）  

4. 異丙醇  

5. 丙酮（部分柱可用，須查手冊）  

6. 六氟異丙醇（少見，特殊污染適用）  

7. 特殊污染：可考慮醋酸銨、磷酸鹽緩沖液、低濃度強酸/堿（需查柱子說明書）

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三、【注意事項】

1. 嚴格查閱色譜柱廠家說明書！ 有些硅膠柱絕不可用強酸強堿，部分聚合物、親水柱材有特殊禁忌溶劑。

2. 清洗流速 不可超過柱規(guī)定最大值，避免填料移動。

3. 清洗方向 默認正向，反沖需慎重。

4. 進樣后及時沖洗柱子，特別是帶有蛋白/脂肪/強緩沖鹽分析后。

5. 清洗完長期不用時，需用100%有機溶劑（甲醇或乙腈）置換后，密封保存柱子，防止柱子干裂/長菌。

6. 若柱效無法恢復、柱壓異常高，可能已不可修復，應更換新柱。

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四、【常見其他柱型（簡要）】

1. 親水作用（HILIC）柱、正相硅膠柱

- 依次用水→乙腈→異丙醇；

- 因極易吸附疏水性有機物，有機溶劑比例逐步遞增遞減。

2. 離子交換柱

- 先用低離子強度緩沖液，再用純水，最后用有機溶劑（若允許）；

- 小心pH和強酸堿損傷樹脂。

3. 凝膠色譜柱（GPC/SEC）

- 僅用指定的有機溶劑清洗，禁止非兼容溶劑。

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五、【參考范例流程】  

以C18柱（4.6×150mm）為例：

1. 10%甲醇/水，流速1.0 mL/min，10 min

2. 50%甲醇/水，1.0 mL/min，10 min

3. 100%甲醇，1.0 mL/min，20 min

4. 100%異丙醇，1.0 mL/min，20 min（如污染嚴重可增至30 min）

5. 100%甲醇（或柱規(guī)定存儲溶劑），1.0 mL/min，10 min

6. 換回流動相平衡30 min

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六、【更科學的建議】

- 液相色譜分析文獻推薦：見《現代色譜分析技術》、《液相色譜分析實驗指導》等。

- 重要復核：始終核查產品說明書，不同品牌（Agilent、Waters、Thermo等）對耐受溶劑/PH/溫度各異。

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七、【常見問題解答】

- 柱壓升高只能清洗解決嗎？

  - 清洗無效時，檢查柱前過濾器、管路是否堵塞，或填料已損。

- 清洗能直接用純有機溶劑、大沖流速嗎？

  - 不建議，易造成堵塞或填料松動。

- 長期存放溶劑哪種最好？

  - 100%甲醇或乙腈（須避光、密封），如廠家指定以其要求為準。

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八、【總結】

科學合理的液相色譜柱清洗可以解決絕大多數常見污染與性能劣化問題，但若柱子結構損耗或化學損壞，清洗也難以恢復。日常規(guī)范操作、及時清洗、科學存放，是延長色譜柱壽命、保障數據質量的關鍵。

如需針對特定柱型、具體污染類型、廠家型號或樣品類型，可進一步補充信息，獲得更針對性的清洗流程建議。