通過(guò)鍵合在硅膠固定相載體上的硅氧烷的酸化水解可以失去鍵合相，從而降低色譜柱的壽命。該酸水解隨著流動(dòng)相pH的降低和柱溫的升高而增加。
與C18相相比，較短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去鍵合相。此外，低純度的硅膠固定相載體和低表面覆蓋的固定相載體使得一些鍵合相更易于酸解。
由于使用超高純度的硅膠固定載體粒子以及鍵合相的極高表面覆蓋，ACE鍵合相表現(xiàn)出極高的穩(wěn)定性。（參見(jiàn)圖9）
盡管所有ACE鍵合相的穩(wěn)定性都很優(yōu)異，但是一些鍵合相并不像其它鍵合相那樣穩(wěn)定。例如，通常認(rèn)為C18鍵合比柱長(zhǎng)較短的烷基相、PFP相和苯基鍵合相更穩(wěn)定。
實(shí)際上，典型的苯基固定相穩(wěn)定性不佳是該相在方法開發(fā)中不常被選擇的主要原因之一。
為了解決這個(gè)問(wèn)題而開發(fā)了ACE C18-AR，其允許色譜分析利用強(qiáng)大的π-π和偶極-偶極分離機(jī)制，并仍然享有C18相的堅(jiān)固性及耐用性。
如圖10所示，ACE C18-AR不僅對(duì)典型的苯基鍵合相具有非常優(yōu)異的穩(wěn)定性，它甚至還比許多其他C18鍵合相表現(xiàn)出更佳的穩(wěn)定性。
類似地，ACE C18-PFP提供了多種分離機(jī)制，可以利用它們實(shí)現(xiàn)更佳的總體分離效果，同時(shí)從C18相的穩(wěn)定性中受益。
圖 9：酸穩(wěn)定性，pH 1.8
條件
色譜柱：ACE 4.6 x 150 mm
流動(dòng)相：50% CH3CN, 50%水
流速：1.0 mL/min
溫度：22 °C
分析物：菲
酸性暴露條件：
流動(dòng)相：50% CH3CN 50% 0.1%TFA（溶于水中）（pH 1.8）
流速：1.0 mL/min
溫度：22 ℃
圖10：加速柱穩(wěn)定性研究：pH 1.9時(shí)80℃
酸性暴露條件：
流動(dòng)相：5:95 MeOH/0.1% TFA（溶于水中）（pH 1.9）
流速：0.20 mL/min
溫度：80 ℃
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
分析物：菲
使用設(shè)計(jì)用于加速柱降解下的條件，ACE C18-AR相顯示保留損失極少，其壽命相當(dāng)于高度穩(wěn)定的ACE C18相。兩種固定相均由相同的超純硅膠而制成，而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾視作在高溫和低pH條件下具有極好穩(wěn)定性的固定相）。
正如預(yù)期的那樣，基于低純度硅膠（Waters Spherisorb ODS2）的C18鍵合柱在這些加速條件下壽命大大降低。
特別值得注意的是常規(guī)苯基色譜柱與ACE C18-AR的壽命比較結(jié)果。與ACE C18-AR相比，盡管使用高純度二氧化硅，苯基色譜柱的壽命仍降低，這表明ACE C18-AR可能適用于那些使用苯丙基色譜柱壽命短的應(yīng)用。
將HPLC和UHPLC連接到通常被稱為L(zhǎng)C-MS的質(zhì)譜儀上已經(jīng)相當(dāng)普遍。
然而，質(zhì)譜對(duì)可能從HPLC/UHPLC色譜柱上洗脫下來(lái)的微量的鍵合相（稱為柱“流失”）非常敏感。柱
流失可能會(huì)干擾分析結(jié)果，并且重要的是，LC-MS應(yīng)用中所選擇的色譜柱具有足夠穩(wěn)定的鍵合相以避免過(guò)量的柱流失。
圖11表明ACE C18-PFP色譜柱幾乎沒(méi)有“流失”干擾LC-MS分析。
C18-PFP（以及ACE C18和ACEC18-AR）的穩(wěn)定性使得這些色譜柱更適合LC-MS應(yīng)用。
圖 11：ACE C18-PFP色譜柱的低柱流失使其成為L(zhǎng)C/MS應(yīng)用中的理想選擇
條件
色譜柱尺寸：50 x 3.0 mm
流動(dòng)相：梯度：在5分鐘內(nèi)從5至95% B，95% B時(shí)持續(xù)5分鐘
A: 0.1％甲酸(溶于水中)
B: 0.1％甲酸(溶于乙腈中)
流速：0.43 mL/min
溫度：60oC
檢測(cè)：安捷倫1100 MSD ESI正離子快速掃描模式,快速掃描全50 – 1000 m/z
樣品：空白運(yùn)行
柱流失可能會(huì)干擾LC-MS應(yīng)用中目標(biāo)分析物的檢測(cè)和測(cè)量。
ACE C18-PFP色譜柱未顯示柱流失。
所有ACE色譜柱的低流失特性使其非常適合LC-MS應(yīng)用。
UHPLC色譜柱可能缺乏耐用性。加上入口篩板堵塞的可能性，您可能面臨色譜柱的耐用性不如HPLC色譜柱的問(wèn)題。
ACE Excel色譜柱非常寬容，并提供您期望從HPLC色譜柱中獲得的相同耐用性和使用壽命。
ACE Excel將改變您對(duì)UHPLC色譜柱耐用性的看法。
ACE Excel色譜柱不僅填裝的更好，還采用了專利的入口篩板設(shè)計(jì)，使其比其它UHPLC色譜柱更不容易被堵塞。
仍建議您像使用任何UHPLC色譜柱一樣過(guò)濾樣品和流動(dòng)相，但ACE Excel色譜柱比其他UHPLC色譜柱更為寬容，并提供與HPLC色譜柱相同的耐用性和使用壽命。
圖 12：ACE Excel色譜柱在耐用性方面有良好的口碑
將2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色譜柱在平均1,000 bar（14,500 psi）壓力下進(jìn)行2000多個(gè)梯度的運(yùn)行。
在該穩(wěn)定性研究結(jié)束時(shí)，柱效（塔板數(shù)）和保留時(shí)間基本保持不變。
